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年底搶先看:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物各種體液、骨髓樣本的采集方法

更新時(shí)間:2015-12-30   點(diǎn)擊次數(shù):2262次

一、消化液的采集
(一) 唾液
1. 直接抽取法 在急性實(shí)驗(yàn)中, 可用吸管直接插入動(dòng)物口腔或唾液腺導(dǎo)管抽吸唾液,此法非常簡(jiǎn)單,但從口腔抽吸唾液會(huì)有雜質(zhì)混入。
2. 腮腺瘺法 在慢性實(shí)驗(yàn)中,收集狗的唾液,要用外科手術(shù)方法將腮腺導(dǎo)管開(kāi)口移向體外,即以腮腺導(dǎo)管為中心,切成一直徑約2~3cm的圓形粘膜片,將此粘膜片,與周圍組織分開(kāi),穿過(guò)皮膚切口引到頰外,將帶有導(dǎo)管開(kāi)口的粘膜片與周圍的皮膚縫合,腮腺分泌的唾液就流出頰外。這種方法可以收集到較純凈的唾液。
(二)胃液
1. 直接收集胃液法 急性實(shí)驗(yàn)時(shí),先將動(dòng)物麻醉,將插胃管經(jīng)口插入胃內(nèi),在灌胃管的出口連一注射器,用此注射器可收集到胃液,此法適用于狗等大型動(dòng)物。如是大鼠,需手術(shù)剖腹,從幽門端向胃內(nèi)插入一塑料管,再由口腔經(jīng)食道將一塑料管插入前胃,用pH7.5、35℃左右的生理鹽水,以12ml/h的流速灌胃,收集流出液,進(jìn)行分析。
2. 制備胃瘺法 在慢性實(shí)驗(yàn)中,收集胃液多用胃瘺法,如全胃瘺法、巴氏小胃瘺法、海氏小胃瘺法等。制備小胃是將動(dòng)物的胃分離出一小部分,縫合起來(lái)形成小胃,主胃與小胃互不相通,主胃進(jìn)行正常消化,從小胃可收集到純凈的胃液。應(yīng)用該法,可以待動(dòng)物恢復(fù)健康后,在動(dòng)物清醒狀態(tài)下反復(fù)采集胃液。
(三)胰液和膽汁
在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,主要是通過(guò)對(duì)胰總管和膽總管的插管而獲得胰液或膽汁。狗的胰總管開(kāi)口于十二指腸降部,在緊靠腸壁處切開(kāi)胰管,結(jié)扎固定并與導(dǎo)管相連,即可見(jiàn)無(wú)色的胰液流入導(dǎo)管。大鼠的胰管與膽管匯集于一個(gè)總管,在其入腸處插管固定,并在近肝門處結(jié)扎和另行插管,可分別收集到胰液和膽汁。
二、腦脊液的采集
(一)狗、兔腦脊液的采集通常采取脊髓穿刺法:動(dòng)物輕度麻醉后,側(cè)臥位固定,使頭部及尾部向腰部盡量彎曲,剪去第七腰椎周圍的被毛。消毒后操作者在動(dòng)物背部用左手姆、食指固定穿刺部位的皮膚,右手持腰穿刺針垂直刺入,當(dāng)有落空感及動(dòng)物的后肢跳動(dòng)時(shí),表明針已達(dá)椎管內(nèi)( 蛛網(wǎng)膜下腔),抽去針芯,即見(jiàn)腦脊液流出。如果無(wú)腦脊液流出,可能是沒(méi)有刺破蛛網(wǎng)膜。輕輕調(diào)節(jié)進(jìn)針?lè)较蚣敖嵌?,如果腦脊液流的太快,插入針芯稍加阻塞,以免導(dǎo)致顱內(nèi)壓突然下降而形成腦疝。
(二)大鼠腦脊液的采集可采用枕大孔直接穿刺法
在大鼠麻醉后,頭部固定于定向儀上。頭頸部剪毛、消毒,用手術(shù)刀沿縱軸切一縱行切口(約2cm)用剪刀鈍性分離頸部背側(cè)肌肉。為避免出血,zui深層附著在骨上的肌肉用手術(shù)刀背刮開(kāi),暴露出枕骨大孔。由枕骨大孔進(jìn)針直接抽取腦脊液。抽取完畢逢好外層肌肉、皮膚。刀口處可撒些磺胺藥粉,防止感染。采完腦脊液后,應(yīng)注入等量的消毒生理鹽水,以保持原來(lái)腦脊髓腔的壓力。
三、骨髓的采集
1. 大鼠、小鼠骨髓的采集:用頸椎脫臼法處死動(dòng)物,剝離出胸骨或股骨,用注射器吸取少量的Hank平衡鹽溶液,沖洗出胸骨或股骨中全部骨髓液。如果是取少量的骨髓作檢查,可將胸骨或股骨剪斷,將其斷面的骨髓擠在有稀釋液的玻片上,混勻后涂片涼干即可染色即查。
2.大動(dòng)物骨髓的采集:狗等大動(dòng)物骨髓的采集可采取活體穿刺方法。先將動(dòng)物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮膚,然后估計(jì)好皮膚到骨髓的距離,把骨髓穿刺針的長(zhǎng)度固定好。操作人員用左手把穿刺點(diǎn)周圍的皮膚繃緊,右手將穿刺針在穿刺點(diǎn)垂直刺入,穿入固定后,輕輕左右旋轉(zhuǎn)將穿刺針鉆入,當(dāng)穿刺針進(jìn)入骨髓腔時(shí)常有落空感。狗骨髓的采集,一般采用髂骨穿刺。
狗等大動(dòng)物常用的骨髓穿刺點(diǎn):胸骨:穿刺部位是胸骨體與胸骨柄連接處。肋骨:穿刺部位是第5~7肋骨各點(diǎn)的中點(diǎn)。脛骨:穿刺部位是股骨內(nèi)側(cè)、靠下端的凹面處。如果穿刺采用的是肋骨,穿刺結(jié)束后要用膠布封貼穿刺孔,防止發(fā)生氣胸。
四、腹水的采集
抽取狗等大動(dòng)物腹水,讓狗按自然站立位固定,穿刺部位在恥骨前緣與臍之間,腹中線兩側(cè)。剪毛消毒,局部浸潤(rùn)麻醉。操作者左手姆、食指緊繃穿刺部位的皮膚,右手控制穿刺深度做垂直穿刺。注意不可刺的太深,以免刺傷內(nèi)臟。穿刺針進(jìn)入腹腔后,腹水多時(shí)可見(jiàn)因腹壓高而自動(dòng)流出。腹水太少可輕輕回抽,并同時(shí)稍稍轉(zhuǎn)動(dòng)一下針頭,一旦有腹水流出,立即固定好針頭及注射器的位置連續(xù)抽取。
抽取大鼠、小鼠的腹水方法簡(jiǎn)單,用左手拇指及食指捏住動(dòng)物頸部皮膚,無(wú)名指、小手指及手掌夾住其尾巴固定好動(dòng)物,使其腹部略朝上,在腹股溝和腹中線之間,消毒皮膚,用8號(hào)針頭刺入腹腔,如腹壓高腹水自然流出,如腹水太少,可借助注射器抽取。
抽腹水時(shí)注意不可速度太快,腹水多時(shí)不要一次大量抽出,以免因腹壓突然下降導(dǎo)致動(dòng)物出現(xiàn)循環(huán)功能障礙等問(wèn)題。

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